Чисто масло от Saposhnikovia divaricata за производство на свещи и сапун, етерично масло на едро, ново за дифузери за тръстикови горелки

кратко описание:

 

2.1. Подготовка на SDE

Коренищата на SD са закупени като сушена билка от Hanherb Co. (Гури, Корея). Растителните материали са потвърдени таксономично от д-р Го-Я Чой от Корейския институт по ориенталска медицина (KIOM). Ваучерен образец (номер 2014 SDE-6) е депозиран в Корейския хербарий на стандартни билкови ресурси. Сушените коренища на SD (320 g) са екстрахирани два пъти със 70% етанол (с 2 часа обратен хладник) и след това екстрактът е концентриран под намалено налягане. Отварата е филтрирана, лиофилизирана и съхранявана при 4°C. Добивът на сух екстракт от суровите изходни материали е 48,13% (w/w).

 

2.2. Количествен анализ с високоефективна течна хроматография (HPLC)

Хроматографският анализ беше извършен с HPLC система (Waters Co., Milford, MA, USA) и фотодиоден детектор. За HPLC анализа на SDE, прим-O-стандартният глюкозилцимифугин е закупен от Корейския институт за насърчаване на традиционната медицина (Кьонсан, Корея), исек-О-глюкозилхамаудол и 4′-O-β-D-глюкозил-5-O-метилвисаминол бяха изолирани в нашата лаборатория и идентифицирани чрез спектрални анализи, предимно чрез ЯМР и MS.

Проби от SDE (0,1 mg) бяха разтворени в 70% етанол (10 mL). Хроматографското разделяне беше извършено с колона XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μм, Waters Co., Милфорд, Масачузетс, САЩ). Мобилната фаза се състоеше от ацетонитрил (А) и 0,1% оцетна киселина във вода (Б) при дебит 1,0 мл/мин. Използвана беше многостъпкова градиентна програма, както следва: 5% А (0 мин), 5–20% А (0–10 мин), 20% А (10–23 мин) и 20–65% А (23–40 мин). Дължината на вълната за детектиране беше сканирана при 210–400 nm и записана при 254 nm. Инжектираният обем беше 10,0μL. Стандартни разтвори за определяне на три хромона бяха приготвени с крайна концентрация от 7,781 mg/mL (първо-O-глюкозилцимифугин), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-глюкозил-5-O-метилвизаминол) и 31,125 мг/мл (сек-О-глюкозилхамаудол) в метанол и се съхранява при 4°C.

2.3. Оценка на противовъзпалителната активностИн витро

2.3.1. Клетъчна култура и обработка на проби

Клетките RAW 264.7 бяха получени от Американската колекция от типови култури (ATCC, Манасас, Вирджиния, САЩ) и култивирани в DMEM среда, съдържаща 1% антибиотици и 5,5% FBS. Клетките бяха инкубирани във влажна атмосфера от 5% CO2 при 37°C. За стимулиране на клетките, средата беше заменена с прясна DMEM среда и липополизахарид (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., Сейнт Луис, Мисури, САЩ) при 1...μg/mL беше добавен в присъствието или отсъствието на SDE (200 или 400μг/мл) за допълнителни 24 часа.

2.3.2. Определяне на азотен оксид (NO), простагландин E2 (PGE2), тумор некрозисен фактор-α(TNF-α) и производството на интерлевкин-6 (IL-6)

Клетките бяха третирани с SDE и стимулирани с LPS в продължение на 24 часа. Производството на NO беше анализирано чрез измерване на нитрити с помощта на реактива на Griess, съгласно предишно проучване [12]. Секреция на възпалителните цитокини PGE2, TNF-α, а IL-6 беше определен с помощта на ELISA комплект (R&D systems) съгласно инструкциите на производителя. Ефектите на SDE върху производството на NO и цитокини бяха определени при 540 nm или 450 nm с помощта на Wallac EnVision.™четец на микроплаки (PerkinElmer).

2.4. Оценка на антиостеоартритната активностИн виво

2.4.1. Животни

Мъжки плъхове Sprague-Dawley (на 7 седмици) са закупени от Samtako Inc. (Осан, Корея) и са отглеждани при контролирани условия с 12-часов цикъл светлина/тъмнина при°C и% влажност. Плъховете са били снабдени с лабораторна диета и водана воляВсички експериментални процедури бяха проведени в съответствие с насоките на Националните институти по здравеопазване (NIH) и одобрени от Комитета за грижа и използване на животни към университета Теджон (Теджон, Република Корея).

2.4.2. Индуциране на остеоартрит с миокардна инсуфициенция (МИА) при плъхове

Животните бяха рандомизирани и разпределени в групи за лечение преди началото на проучването (на група). Разтвор на MIA (3 mg/50μ1 л 0,9% физиологичен разтвор) беше инжектиран директно в вътреставното пространство на дясното коляно под анестезия, индуцирана със смес от кетамин и ксилазин. Плъховете бяха разделени на случаен принцип в четири групи: (1) група с физиологичен разтвор без инжектиране на MIA, (2) група с MIA с инжектиране на MIA, (3) група, третирана с SDE (200 mg/kg) с инжектиране на MIA и (4) група, третирана с индометацин (IM) (2 mg/kg) с инжектиране на MIA. На плъховете беше прилаган перорално SDE и IM 1 седмица преди инжектирането на MIA в продължение на 4 седмици. Дозировката на SDE и IM, използвана в това проучване, се основаваше на тази, използвана в предишни проучвания [10,13,14].

2.4.3. Измервания на разпределението на тежестта върху задните лапи

След индуциране на остеоартрит, първоначалният баланс в способността за носене на тегло на задните лапи е нарушен. За оценка на промените в толеранса за носене на тегло е използван тестер за инвалидност (Linton instrumentation, Norfolk, UK). Плъховете са внимателно поставени в измервателната камера. Силата на носене на тегло, упражнявана от задния крайник, е осреднена за период от 3 секунди. Коефициентът на разпределение на теглото е изчислен по следното уравнение: [тегло върху десния заден крайник/(тегло върху десния заден крайник + тегло върху левия заден крайник)] × 100 [15].

2.4.4. Измервания на нивата на серумните цитокини

Кръвните проби бяха центрофугирани при 1500 g за 10 минути при 4°C; след това серумът беше събран и съхраняван при -70°C до употреба. Нивата на IL-1β, IL-6, TNF-α, и PGE2 в серума бяха измерени с помощта на ELISA комплекти от R&D Systems (Минеаполис, Минесота, САЩ) съгласно инструкциите на производителя.

2.4.5. Количествен RT-PCR анализ в реално време

Тоталната РНК беше екстрахирана от тъкан на колянната става, използвайки TRI reagent® (Sigma-Aldrich, Сейнт Луис, Мисури, САЩ), обратно транскрибирана в кДНК и PCR-амплифицирана, използвайки TM One Step RT PCR комплект със SYBR green (Applied Biosystems, Гранд Айлънд, Ню Йорк, САЩ). Количествената PCR в реално време беше проведена, използвайки Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR системата (Applied Biosystems, Гранд Айлънд, Ню Йорк, САЩ). Праймерните последователности и последователността на сондата са показани в Таблица.1Аликвотни проби от кДНК от пробите и равно количество кДНК от GAPDH бяха амплифицирани с TaqMan® Universal PCR master mixture, съдържаща ДНК полимераза, съгласно инструкциите на производителя (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR условията бяха 2 минути при 50°C, 10 минути при 94°C, 15 секунди при 95°C и 1 минута при 60°C за 40 цикъла. Концентрацията на целевия ген беше определена с помощта на сравнителния Ct метод (прагов брой цикли в точката на пресичане между амплификационния участък и прага), съгласно инструкциите на производителя.

Цена франко борда:0,5 - 9 999 щ.д. / бройка

Мин. количество за поръчка:100 броя/бройки

Възможност за доставка:10000 броя/бройки на месец