Чисто масло Saposhnikovia divaricata за производство на свещи и сапуни етерично масло за дифузери на едро ново за дифузери за тръстикова горелка

кратко описание:

 

2.1. Подготовка на SDE

Коренищата на SD бяха закупени като изсушена билка от Hanherb Co. (Guri, Корея). Растителните материали са потвърдени таксономично от д-р Go-Ya Choi от Корейския институт по източна медицина (KIOM). Образец от ваучер (номер 2014 SDE-6) беше депозиран в Корейския хербариум на стандартните билкови ресурси. Изсушени коренища на SD (320 g) се екстрахират два пъти със 70% етанол (с 2 часа кипене) и след това екстрактът се концентрира при понижено налягане. Отварата се филтрира, лиофилизира и съхранява при 4°С. Добивът на сух екстракт от сурови изходни материали е 48.13% (w/w).

 

2.2. Количествен анализ с високоефективна течна хроматография (HPLC).

Хроматографският анализ се извършва с HPLC система (Waters Co., Milford, MA, USA) и фотодиоден детектор. За HPLC анализ на SDE, прим.O-стандартът на глюкозилцимифугин е закупен от Корейския институт за насърчаване на традиционната медицина (Gyeongsan, Корея) исек-О-глюкозилхамаудол и 4'-O-β-D-глюкозил-5-O-methylvisamminol бяха изолирани в нашата лаборатория и идентифицирани чрез спектрални анализи, предимно чрез NMR и MS.

SDE проби (0.1 mg) се разтварят в 70% етанол (10 mL). Хроматографското разделяне се извършва с колона XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Милфорд, Масачузетс, САЩ). Подвижната фаза се състои от ацетонитрил (А) и 0.1% оцетна киселина във вода (В) при скорост на потока 1.0 mL/min. Използвана е програма с многоетапен градиент, както следва: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) и 20–65% A (23–40 min) ). Дължината на вълната на откриване беше сканирана при 210–400 nm и записана при 254 nm. Инжекционният обем беше 10,0μL. Стандартни разтвори за определяне на три хромона се приготвят при крайна концентрация от 7,781 mg/mL (първ.O-глюкозилцимифугин), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-глюкозил-5-O-метилвизаминол) и 31,125 mg/mL (сек-О-глюкозилхамаудол) в метанол и се държи при 4°С.

2.3. Оценка на противовъзпалителната активностИн витро

2.3.1. Клетъчна култура и третиране на проби

RAW 264.7 клетки бяха получени от Американската колекция от типови култури (ATCC, Manassas, VA, USA) и отгледани в DMEM среда, съдържаща 1% антибиотици и 5.5% FBS. Клетките се инкубират във влажна атмосфера с 5% СО2 при 37°С. За да се стимулират клетките, средата беше заменена със свежа DMEM среда и липополизахарид (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) при 1μg/mL се добавя в присъствието или отсъствието на SDE (200 или 400μg/mL) за още 24 часа.

2.3.2. Определяне на азотен оксид (NO), простагландин Е2 (PGE2), фактор на туморна некроза-α(TNF-α) и производство на интерлевкин-6 (IL-6).

Клетките се третират с SDE и се стимулират с LPS в продължение на 24 часа. Производството на NO се анализира чрез измерване на нитрит с помощта на реактива на Griess съгласно предишно проучване [12]. Секреция на възпалителните цитокини PGE2, TNF-αи IL-6 се определя с помощта на комплект ELISA (R&D системи) съгласно инструкциите на производителя. Ефектите на SDE върху производството на NO и цитокини се определят при 540 nm или 450 nm с помощта на Wallac EnVision™четец на микроплаки (PerkinElmer).

2.4. Оценка на антиостеоартритната активностIn Vivo

2.4.1. животни

Мъжки плъхове Sprague-Dawley (на възраст 7 седмици) бяха закупени от Samtako Inc. (Осан, Корея) и настанени при контролирани условия с 12-часов цикъл светлина/тъмнина при°C и% влажност. На плъховете е осигурена лабораторна диета и водаad libitum. Всички експериментални процедури бяха извършени в съответствие с насоките на Националния институт по здравеопазване (NIH) и одобрени от Комитета за грижа и използване на животните на университета Daejeon (Daejeon, Република Корея).

2.4.2. Индуциране на ОА с MIA при плъхове

Животните бяха рандомизирани и разпределени в групи за лечение преди началото на изследването (на група). MIA разтвор (3 mg/50μL 0,9% физиологичен разтвор) се инжектира директно във вътреставното пространство на дясното коляно под анестезия, предизвикана със смес от кетамин и ксилазин. Плъховете бяха разделени на случаен принцип в четири групи: (1) група с физиологичен разтвор без инжекция с MIA, (2) група с MIA с инжекция с MIA, (3) група, лекувана със SDE (200 mg/kg) с инжекция с MIA и (4 ) групата, лекувана с индометацин (IM-) (2 mg/kg) с MIA инжекция. На плъховете са прилагани орално SDE и IM 1 седмица преди инжектирането на MIA в продължение на 4 седмици. Дозировката на SDE и IM, използвани в това проучване, се основава на тези, използвани в предишни проучвания [10,13,14].

2.4.3. Измервания на разпределението на тежестта на задната лапа

След индукция на ОА, първоначалният баланс в способността за носене на тежест на задните лапи беше нарушен. Използван е тестер за неспособност (Linton instrumentation, Norfolk, UK) за оценка на промените в толеранса за носене на тегло. Плъховете бяха внимателно поставени в измервателната камера. Носещата сила, упражнявана от задния крайник, беше осреднена за период от 3 s. Коефициентът на разпределение на теглото се изчислява по следното уравнение: [тегло на десния заден крайник/(тегло на десния заден крайник + тегло на левия заден крайник)] × 100 [15].

2.4.4. Измервания на серумните нива на цитокини

Кръвните проби се центрофугират при 1500 g за 10 минути при 4°C; след това серумът се събира и съхранява при -70°C до употреба. Нивата на IL-1β, IL-6, TNF-αи PGE2 в серума бяха измерени с помощта на комплекти ELISA от R&D Systems (Минеаполис, MN, САЩ) съгласно инструкциите на производителя.

2.4.5. Количествен RT-PCR анализ в реално време

Общата РНК се екстрахира от тъкан на колянна става с помощта на TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), обратно транскрибирана в cDNA и PCR-амплифицирана с помощта на TM One Step RT PCR комплект със SYBR зелено (Applied Biosystems , Гранд Айлънд, Ню Йорк, САЩ). Количественият PCR в реално време се извършва с помощта на системата Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Праймерните последователности и пробата-последователност са показани в Таблица1. Аликвотни части от пробни сДНК и равно количество GAPDH сДНК бяха амплифицирани с TaqMan® Universal PCR основна смес, съдържаща ДНК полимераза съгласно инструкциите на производителя (Applied Biosystems, Фостър, Калифорния, САЩ). Условията на PCR бяха 2 минути при 50°С, 10 минути при 94°С, 15 секунди при 95°С и 1 минута при 60°С за 40 цикъла. Концентрацията на целевия ген се определя с помощта на сравнителния Ct (номер на праговия цикъл в пресечната точка между диаграмата на амплификация и прага) метод, съгласно инструкциите на производителя.

FOB Цена:US $0,5 - 9 999 / Брой

Минимално количество за поръчка:100 бр./бр

Възможност за доставка:10000 бройки/бройки на месец